Результаты научных исследования на канцерогенность ГМДП Ликопид® в хронических опытах на мышах и крысах

Дата публикации: 16.03.2018

569

Результаты исследования канцерогенных свойств глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП, Ликопид®) в хронических опытах на мышах и крысах

Авторы: Олег С. Гудырев, Татьяна М. Андронова, Евгения И. Нестерова
Издание: Research Results in Pharmacology 4(4): 97–106 UDC: 615.37:616-006:636.028 DOI 10.3897/rrpharmacology.4.32191
Год: 2018

Резюме: Глюкозаминилмурамилпептиды составляют подгруппу полусинтетических микробных иммуномодуляторов. Препарат Ликопид® (ГМДП, глюкозаминилмурамилдипептид) предназначен для комплексной терапии состояний, сопровождающихся вторичными иммунодефицитами. Прозрачность механизма действия ГМДП позволяет отнести его к разряду перспективных имммунотерапевтических лекарственных средств, востребованных в комплексной терапии многих заболеваний, резистентных к традиционному лечению. Целью настоящего исследования явилось изучение канцерогенности ГМДП в хронических экспериментах на животных.

Ключевые слова: глюкозаминилмурамилдипептид, гмдп, канцерогенность гмдп ликопид, канцерогенные свойства ГМДП, ликопид

https://rrpharmacology.ru/article/32191/

УДК: 615.37:616-006:636.028

Результаты исследования канцерогенных свойств глюкозаминилмурамилдипептида (Ликопид) в хронических опытах на мышах и крысах

Олег С. Гудырев¹, Татьяна М. Андронова², Евгения И. Нестерова²

¹НИИ Фармакологии живых систем, Белгородский государственный национальный исследовательский университет, д. 85, ул. Победы, Белгород, 308015, Россия
²Акционерное общество «Пептек», д. 94, корп. 2, пр-т Вернадского, г. Москва, 119571, Россия

Аннотация

Введение: глюкозаминилмурамилпептиды составляют подгруппу полусинтетических микробных иммуномодуляторов. Препарат Ликопид® (ГМДП, глюкозаминил-мурамилдипептид) предназначен для комплексной терапии состояний, сопровождающихся вторичными иммунодефицитами. Прозрачность механизма действия ГМДП позволяет отнести его к разряду перспективных имммунотерапевтических лекарственных средств, востребованных в комплексной терапии многих заболеваний, резистентных к традиционному лечению. Целью настоящего исследования явилось изучение канцерогенности ГМДП в хронических экспериментах на животных.

Материалы и методы: изучение канцерогенного действия ГМДП (Ликопид®) проведено на мышах гибридах F1 CBAxC57BL6 и крысах Вистар обоего пола при внутрижелудочном введении пять дней в неделю (ПН-ВТ-СР-ЧТ-ПТ) в течение 18 месяцев в дозах 0,186 мг/кг, 1,86 мг/кг и 6,13 мг/кг мышам и в течение 21 месяца в дозах 0,086 мг/кг, 0,86 мг/кг и 2,83 мг/кг крысам.

Результаты и обсуждение: результаты клинического наблюдения за экспериментальными животными в ходе проведения исследования продемонстрировали отсутствие отличий между мышами и крысами экспериментальных и контрольных групп.

Заключение: внутрижелудочное введение ГМДП самцам и самкам мышей в течение 18 месяцев и крыс в течение 21 месяца в изученных дозах не приводит к возникновению у подопытных животных опухолевых образований.

Ключевые слова: глюкозаминилмурамилдипептид, гмдп, канцерогенность, ликопид

Введение

Глюкозаминилмурамилпептиды составляют подгруппу полусинтетических микробных иммуномодуляторов. Родоначальником подгруппы является мурамилдипептид (МДП) – многократно повторяющийся структурный элемент в составе пептидогликана клеточных стенок всех бактерий. Это минимальный структурный фрагмент молекулы пептидогликана, обладающий фармакологической активностью. Некоторые его структурные дериваты, получаемые полусинтетическим путем, нашли медицинское применение благодаря открытию у них адъювантных, иммуномодулирующих, детоксицирующих и противоопухолевых свойств, сочетающихся с фармакологической безопасностью. Зарегистированы дериваты МДП для терапии опухолей – Ромутид® (Romutide®, мурамилдипептид, к которому через аминокислоту лизин присоединена стеариновая кислота), Мепакт® (Mepact®, mifamurtide, мифамуртид, мурамилтрипептид фосфатидил этаноламин, MTP-PE), Лиастен® (глюкозаминилмурамилпентапептид), и для комплексной терапии состояний, сопровождающихся вторичными иммунодефицитами, – Ликопид® (ГМДП, глюкозаминил-мурамилдипептид). В стадии клинических исследований применимости для противоопухолевой терапии – препараты DTP-GDP (ImmTher) и ГМДП-А (глюкозаминил-мурамилдипептид кислота).

Спецификой дериватов МДП (фрагментов клеточных стенок всех бактерий) является их способность взаимодействовать с внутриклеточными цитоплазмическими рецепторами врожденного иммунитета семейства NOD, экспрессируемым в фагоцитирующих клетках, и вызывать активацию врожденного иммунитета идентично самим бактериям. Связывание МДП и его дериватов с рецепторами NOD приводит к активации транскрипционного фактора, инициирующего синтез цитокинов, которые стимулируют функции иммунокомпетентных клеток.

Для глюкозаминил-мурамилдипептида (ГМДП) было доказано, что его взаимодействие с NOD2 рецептором является абсолютно специфичным. Для ГМДП (лекарственный препарат Ликопид®) однозначно установлена причинно-следственная связь между способностью связывания с образ-распознающими сигнальными рецепторами (PRR-pattern-recognition receptors) семейства NOD2 и способностью вызывать каскад процессов, ответственных за стимуляцию иммунитета. Принадлежность ГМДП к агонистам NOD2, экспрессируемым в фагоцитирующих клетках, детально раскрывает механизм стимуляции функций иммунокомпетентных клеток этим дериватом МДП. Такая прозрачность механизма действия ГМДП позволяет отнести его к разряду перспективных имммунотерапевтических лекарственных средств, востребованных в комплексной терапии многих заболеваний, резистентных к традиционному лечению.

Целью настоящего исследования явилось изучение канцерогенности глюкозаминил-мурамилдипептида (ГМДП. Ликопид®) в хронических экспериментах на животных.

Материалы и методы исследования

Проведение настоящего исследования одобрено локальным этическим комитетом по работе с лабораторными животными.

Изучение канцерогенного действия ГМДП (Ликопид®) проведено на мышах гибридах F1 CBAxC57BL6 и крысах Вистар обоего пола при внутрижелудочном введении пять дней в неделю (ПН-ВТ-СР-ЧТ-ПТ) в течение 18 месяцев в дозах 0,186 мг/кг, 1,86 мг/кг и 6,13 мг/кг мышам и в течение 21 месяца в дозах 0,086 мг/кг, 0,86 мг/кг и 2,83 мг/кг крысам (изначально планировалось осуществлять введение препарата крысам в течение 24 месяцев, однако, с учетом динамики летальности, было принято решение о досрочном завершении исследования на крысах). Представленные дозы получены с использованием межвидового пересчета суточных доз для человека 1 мг, 10 мг и 33 мг, соответственно, по Freireich et al., 1966. В качестве контроля использовали данные, полученные на интактных животных (внутрижелудочное введение соответствующего объема растворителя). Для проведения исследований использовали здоровых самок и самцов мышей и крыс, по 50 животных каждого пола в группе. Распределение по группам – в соответствии с массой тела, разброс не более 10%.

Животные содержались в стандартных условиях, в соответствии с утвержденными Принципами надлежащей лабораторной практики. Клетки – индивидуально вентилируемые системы Tecniplast для мелких лабораторных животных. Корм – гранулированный для мелких лабораторных животных – грызунов. Доступ к корму – свободный. Вода – очищенная, стерилизованная УФ-облучением. Доступ к воде – свободный, в поилках Tecniplast. Условия окружающей среды – температура воздуха в пределах 20-26оС, относительная влажность воздуха в пределах 30-70%. Фотопериод 12 часов ночь – 12 часов день при искусственном освещении. Акклиматизация и отбор животных для исследования – карантин не менее 10 дней. Обогащение среды – мышиные домики Tecniplast.

За животными проводили ежедневное наблюдение: фиксировали общее состояние, токсические явления, гибель животных, возникновение опухолей. Взвешивание животных проводили: в течение первых двух месяцев – еженедельно, в течение 3-го и 4-го месяцев – два раза в месяц, далее – один раз в месяц. В случае гибели животного в максимально ранние сроки проводили полную некропсию и макроскопическое обследование внутренних органов животного на предмет наличия опухоли. Проводилась плановая некропсия тел мышей и крыс, получавших исследуемый препарат в течение 18 и 21 месяца, соответственно, и забор органов и тканей с последующим гистологическим исследованием. Метод эвтаназии – помещение в СО2-камеру.

Количественные результаты подвергали статистической обработке путем расчета среднего арифметического (M), стандартной ошибки (±m). Межгрупповые различия анализировались параметрическими (t-критерий Стьюдента) методами. Различия считали статистически значимыми при значениях p<0,05. Для статистических расчетов использовались программы Microsoft Excel и Statistica 10.0.

Результаты исследования

Результаты клинического наблюдения за экспериментальными животными в ходе проведения исследования продемонстрировали отсутствие отличий между мышами и крысами экспериментальных и контрольных групп.

Так, общее состояние животных в течение всего срока наблюдения за ними изменялось в соответствии с возрастными особенностями. Особенностей поведения у экспериментальных животных, отличных от контрольных животных, отмечено не было.

Интенсивность и характер двигательной активности в течение всего срока наблюдения не отличались от показателей контрольных животных и характеризовались постепенным угнетением в соответствии с возрастными особенностями. Судороги отсутствовали у всех животных, находившихся под наблюдением. Координация движений и тонус скелетных мышц у животных в экспериментальных группах не нарушались в ходе эксперимента и не отличались от соответствующих показателей контрольных животных.

Реакция на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители была адекватной у всех подопытных животных, отличий между экспериментальными и контрольными животными не наблюдалось. Частота и глубина дыхательных движений у экспериментальных животных визуально была неотличимой от животных из контрольных групп.

При наблюдении за состоянием волосяного покрова отмечали сезонные явления, связанные с линькой животных. Состояние кожного покрова экспериментальных животных при этом не отличалось от контрольных животных.

Нарушений функционирования органов чувств не было зарегистрировано ни у одного животного после начала введения исследуемого вещества. Во время введения ГМДП видимые слизистые оболочки у экспериментальных животных, как и у контрольных животных, оставались бледно-розового цвета, влажность их не изменялась, симптомы бронхита, конъюнктивита и ринита отсутствовали.

Частота дефекации и мочеиспускания, консистенция фекальных масс и окраска мочи подопытных и контрольных животных визуально не изменялись в результате введения ГМДП (Ликопид®).

Визуальных отклонений в потреблении корма и воды животными не наблюдалось.

В ходе выполнения исследования наблюдалась гибель животных, связанная с естественными возрастными изменениями. Летальность в большей степени наблюдалась у самцов, нежели у самок (рисунки 1-8).

Рисунок 1. Динамика летальности в группе контрольных мышей

Рисунок 2. Динамика летальности в группе мышей, получавших ГМДП в дозе 0,186 мг/кг

Рисунок 3. Динамика летальности в группе мышей, получавших ГМДП в дозе 1,86 мг/кг

Рисунок 4. Динамика летальности в группе мышей, получавших ГМДП в дозе 6,13 мг/кг

Рисунок 5. Динамика летальности в группе контрольных крыс

Рисунок 6. Динамика летальности в группе крыс, получавших ГМДП в дозе 0,086 мг/кг

Рисунок 7. Динамика летальности в группе крыс, получавших ГМДП в дозе 0,86 мг/кг

Рисунок 8. Динамика летальности в группе крыс, получавших ГМДП в дозе 2,83 мг/кг

С учетом динамики летальности крыс было принято решение о досрочном завершении исследования, проведении некропсии с последующим гистологическим исследованием органов и тканей крыс, выживших в результате внутрижелудочного введения исследуемого препарата Ликопид (ГМДП) в течение 21 месяца.

Таким образом, к моменту завершения исследования живыми осталось в зависимости от полученной дозы препарата от 96% до 54% самцов и от 96% до 78% самок мышей, а также от 0% до 4% самцов и от 0% до 12% самок крыс. Появления опухолей не обнаружено (таблицы 1, 2).

Таблица 1. Количество мышей, оставшихся в живых по состоянию на конец исследования

Доза	Самцы		Самки
Доза		Количество живых животных	Количество живых животных	Сроки обнаружения опухолей
Контроль	47 (94%)	Не обнаружено	48 (96%)	Не обнаружено
0,186 мг/кг	48 (96%)	Не обнаружено	46 (92%)	Не обнаружено
1,86 мг/кг	34 (68%)	Не обнаружено	44 (88%)	Не обнаружено
6,13 мг/кг	27 (54%)	Не обнаружено	39 (78%)	Не обнаружено

Таблица 2. Количество крыс, оставшихся в живых по состоянию на конец исследования

Доза	Самцы		Самки
Доза	Количество живых животных	Сроки обнару-жения опухолей	Количество живых животных	Сроки обнаружения опухолей
Контроль	2 (4%)	Не обнаружено	2 (4%)	Не обнаружено
0,086 мг/кг	2 (4%)	Не обнаружено	6 (12%)	Не обнаружено
0,86 мг/кг	0 (0%)	Не обнаружено	4 (8%)	Не обнаружено
2,83 мг/кг	1 (2%)	Не обнаружено	0 (0%)	Не обнаружено

Показатели массы тела мышей и крыс, наблюдавшиеся при введении ГМДП в изученных дозах, приведены в таблицах 3 и 4, соответственно.

Таблица 3. Результаты изучения массы тела мышей в ходе исследования канцерогенных свойств ГМДП

Сроки Группа		День наблюдения
Сроки Группа		1	8	15	22	29	36	43	50	57
Самцы контроль	M	17,08	18,00	19,42	20,66	21,66	22,46	23,54	24,64	25,52
Самцы контроль	m	0,12	0,11	0,17	0,16	0,15	0,15	0,16	0,15	0,16
Самцы 0,186 мг/кг	M	16,86	18,06	19,62	20,44	21,20	22,76	23,40	24,30	25,36
	m	0,13	0,12	0,16	0,17	0,15	0,17	0,15	0,17	0,17
	р	0,208	0,709	0,398	0,345	0,033	0,192	0,526	0,134	0,495
Самцы 1,86 мг/кг	M	17,12	17,96	19,60	20,56	21,58	22,44	23,60	24,48	25,38
	m	0,11	0,11	0,15	0,16	0,16	0,15	0,15	0,16	0,16
	р	0,803	0,795	0,422	0,657	0,718	0,925	0,784	0,460	0,542
Самцы 6,13 мг/кг	M	17,10	18,04	19,72	20,68	21,46	22,20	23,62	24,40	25,52
	m	0,12	0,11	0,15	0,17	0,15	0,15	0,15	0,16	0,15
	р	0,905	0,799	0,189	0,932	0,355	0,232	0,719	0,272	1,000
Самки контроль	M	17,00	18,18	19,12	20,52	21,36	22,52	23,52	24,56	25,74
Самки контроль	m	0,11	0,12	0,15	0,15	0,15	0,15	0,15	0,17	0,16
Самки 0,186 мг/кг	M	16,80	17,96	19,66	20,62	21,58	22,50	23,88	24,38	25,58
	m	0,11	0,12	0,16	0,17	0,16	0,14	0,15	0,17	0,16
	р	0,219	0,194	0,015	0,668	0,314	0,923	0,092	0,447	0,485
Самки 1,86 мг/кг	M	17,02	17,74	19,58	20,60	21,62	22,38	23,32	24,40	25,76
	m	0,12	0,12	0,16	0,16	0,16	0,17	0,16	0,16	0,17
	р	0,903	0,010	0,040	0,721	0,230	0,532	0,363	0,496	0,931
Самки 6,13 мг/кг	M	17,04	18,16	19,52	20,22	21,84	22,32	23,46	24,36	25,36
	m	0,12	0,12	0,15	0,16	0,15	0,16	0,17	0,15	0,17
	р	0,808	0,905	0,064	0,184	0,027	0,359	0,789	0,380	0,111

Примечание: здесь и далее: M – среднее арифметическое; m – стандартная ошибка; p – уровень статистической значимости в сравнении с контролем.

Таблица 3. Продолжение

Сроки Группа		День наблюдения
Сроки Группа		64	78	92	108	124	154	185	215	246
Самцы контроль	M	26,32	29,92	32,14	34,98	37,76	39,84	36,92	33,98	31,12
Самцы контроль	m	0,15	0,20	0,26	0,26	0,26	0,25	0,30	0,35	0,38
Самцы 0,186 мг/кг	M	26,52	29,84	32,40	34,32	37,30	39,50	36,74	33,70	30,84
	m	0,15	0,23	0,26	0,26	0,24	0,29	0,30	0,40	0,37
	р	0,351	0,795	0,478	0,074	0,193	0,378	0,672	0,599	0,599
Самцы 1,86 мг/кг	M	26,66	29,80	32,18	34,50	37,64	39,50	37,50	33,70	29,98
	m	0,16	0,21	0,24	0,23	0,26	0,25	0,32	0,35	0,33
	р	0,128	0,680	0,910	0,167	0,742	0,341	0,185	0,574	0,027
Самцы 6,13 мг/кг	M	26,92	29,88	32,30	34,70	37,72	39,36	37,06	33,58	29,28
	m	0,16	0,21	0,24	0,24	0,26	0,25	0,33	0,37	0,32
	р	0,007	0,891	0,655	0,428	0,913	0,179	0,756	0,432	0,000
Самки контроль	M	26,14	30,00	32,70	34,22	37,40	39,56	34,72	31,02	28,20
Самки контроль	m	0,14	0,23	0,27	0,25	0,27	0,24	0,35	0,33	0,41
Самки 0,186 мг/кг	M	26,44	30,02	32,48	34,32	37,94	39,82	34,00	30,60	27,54
	m	0,17	0,22	0,24	0,23	0,24	0,23	0,31	0,38	0,42
	р	0,179	0,949	0,542	0,772	0,141	0,433	0,126	0,402	0,265
Самки 1,86 мг/кг	M	26,52	29,84	32,62	34,80	37,66	39,98	34,34	30,88	27,56
	m	0,15	0,20	0,23	0,25	0,24	0,24	0,33	0,36	0,42
	р	0,069	0,598	0,820	0,105	0,474	0,218	0,426	0,773	0,281
Самки 6,13 мг/кг	M	26,72	29,84	32,68	34,64	37,94	39,38	34,54	31,84	27,24
	m	0,17	0,22	0,23	0,25	0,24	0,22	0,34	0,31	0,37
	р	0,011	0,614	0,955	0,238	0,135	0,579	0,711	0,073	0,088

Таблица 3. Окончание

Сроки Группа		День наблюдения
Сроки Группа		277	305	336	366	397	427	458	489	519	550
Самцы контроль	M	31,48	31,18	32,20	32,44	32,32	32,10	32,20	32,04	31,69	32,17
Самцы контроль	m	0,33	0,31	0,31	0,34	0,36	0,34	0,45	0,41	0,31	0,46
Самцы 0,186 мг/кг	M	30,92	31,28	31,30	31,88	31,50	31,90	32,28	32,38	32,69	31,67
	m	0,33	0,37	0,38	0,38	0,34	0,35	0,55	0,46	0,40	0,67
	р	0,238	0,836	0,069	0,277	0,100	0,684	0,911	0,582	0,051	0,537
Самцы 1,86 мг/кг	M	30,78	31,18	31,50	31,96	32,32	31,86	29,48	26,20	25,50	24,74
	m	0,37	0,39	0,36	0,37	0,38	0,38	0,47	0,61	0,51	0,98
	р	0,165	1,000	0,142	0,344	1,000	0,638	0,000	0,000	0,000	0,000
Самцы 6,13 мг/кг	M	31,54	31,26	31,30	31,88	32,00	31,78	29,82	26,63	24,79	23,67
	m	0,34	0,35	0,37	0,40	0,37	0,36	0,47	0,56	0,38	0,92
	р	0,900	0,863	0,065	0,294	0,533	0,518	0,000	0,000	0,000	0,000
Самки контроль	M	26,22	25,72	26,52	26,78	26,56	25,76	26,96	28,46	28,82	28,92
Самки контроль	m	0,50	0,50	0,55	0,55	0,61	0,49	0,64	0,71	0,47	0,58
Самки 0,186 мг/кг	M	26,48	25,88	26,44	26,82	25,40	25,98	28,48	28,96	29,98	29,02
	m	0,53	0,55	0,49	0,52	0,50	0,52	0,55	0,65	0,43	0,60
	р	0,722	0,830	0,913	0,958	0,146	0,760	0,075	0,604	0,070	0,900
Самки 1,86 мг/кг	M	26,70	26,24	26,90	25,90	25,94	25,86	25,86	26,26	26,11	24,84
	m	0,52	0,51	0,52	0,55	0,53	0,56	0,51	0,48	0,41	0,41
	р	0,504	0,468	0,617	0,262	0,443	0,893	0,181	0,012	0,000	0,000
Самки 6,13 мг/кг	M	26,26	25,98	26,56	26,42	25,98	26,62	25,84	23,91	22,97	25,13
	m	0,58	0,55	0,55	0,53	0,55	0,52	0,61	0,82	0,78	0,97
	р	0,958	0,727	0,959	0,640	0,481	0,232	0,207	0,000	0,000	0,001

Таблица 4. Результаты изучения массы тела крыс в ходе исследования канцерогенных свойств ГМДП

Сроки Группа		День наблюдения
Сроки Группа		1	8	15	22	29	36	43	50
Самцы контроль	M	174,68	176,30	177,38	179,80	182,48	185,46	187,56	190,28
Самцы контроль	m	0,41	0,33	0,26	0,30	0,24	0,29	0,25	0,25
Самцы 0,086 мг/кг	M	174,92	176,56	177,78	180,12	182,22	185,10	187,26	189,78
	m	0,47	0,35	0,24	0,30	0,23	0,29	0,25	0,30
	р	0,703	0,589	0,259	0,451	0,433	0,388	0,395	0,206
Самцы 0,86 мг/кг	M	175,86	176,16	177,56	179,86	182,36	185,00	187,38	189,94
	m	0,45	0,38	0,23	0,28	0,26	0,31	0,25	0,30
	р	0,057	0,782	0,606	0,884	0,736	0,281	0,606	0,388
Самцы 2,83 мг/кг	M	175,30	176,18	177,58	179,92	183,00	185,70	187,38	187,62
	m	0,42	0,36	0,26	0,28	0,22	0,29	0,25	0,26
	р	0,294	0,805	0,587	0,770	0,113	0,559	0,608	0,000
Самки контроль	M	164,50	165,72	167,68	170,12	172,42	175,26	177,48	180,26
Самки контроль	m	0,45	0,38	0,26	0,26	0,24	0,30	0,22	0,28
Самки 0,086 мг/кг	M	165,30	165,88	167,22	170,08	172,50	174,88	177,38	180,20
	m	0,42	0,36	0,24	0,28	0,25	0,26	0,23	0,30
	р	0,201	0,762	0,199	0,917	0,815	0,343	0,756	0,884
Самки 0,86 мг/кг	M	164,72	166,34	167,58	170,46	172,52	174,98	177,32	179,96
	m	0,45	0,33	0,24	0,27	0,24	0,30	0,25	0,26
	р	0,732	0,224	0,780	0,365	0,768	0,509	0,629	0,439
Самки 2,83 мг/кг	M	165,32	165,70	167,28	170,18	172,14	174,48	177,62	180,34
	m	0,40	0,37	0,26	0,28	0,23	0,28	0,21	0,28
	р	0,176	0,970	0,278	0,875	0,399	0,063	0,645	0,840

Таблица 4. Продолжение

Сроки Группа		День наблюдения
Сроки Группа		57	64	78	92	108	124	154	185
Самцы контроль	M	192,44	195,06	200,36	211,46	219,92	227,82	235,22	232,48
Самцы контроль	m	0,27	0,26	0,43	0,33	0,45	0,60	0,46	0,76
Самцы 0,086 мг/кг	M	192,38	194,94	199,56	210,54	220,04	228,02	234,68	233,80
	m	0,23	0,28	0,45	0,37	0,47	0,63	0,45	0,73
	р	0,864	0,755	0,201	0,066	0,854	0,819	0,405	0,213
Самцы 0,86 мг/кг	M	192,42	195,02	200,30	210,74	219,96	227,74	234,64	233,34
	m	0,26	0,25	0,51	0,35	0,41	0,71	0,45	0,76
	р	0,957	0,912	0,928	0,142	0,948	0,931	0,371	0,428
Самцы 2,83 мг/кг	M	187,34	192,26	200,90	211,08	220,42	228,12	235,70	233,92
	m	0,25	0,22	0,42	0,32	0,46	0,70	0,48	0,84
	р	0,000	0,000	0,369	0,414	0,440	0,745	0,476	0,208
Самки контроль	M	182,14	185,08	190,74	201,10	211,14	220,78	228,46	230,10
Самки контроль	m	0,24	0,27	0,40	0,49	0,49	0,52	0,33	0,41
Самки 0,086 мг/кг	M	182,56	185,32	189,56	200,30	210,58	221,38	229,30	230,72
	m	0,23	0,25	0,44	0,53	0,48	0,51	0,37	0,38
	р	0,206	0,522	0,049	0,272	0,417	0,412	0,091	0,273
Самки 0,86 мг/кг	M	182,44	185,28	190,08	201,66	211,40	220,50	228,96	230,70
	m	0,26	0,29	0,40	0,58	0,46	0,52	0,36	0,43
	р	0,390	0,620	0,248	0,464	0,700	0,705	0,308	0,319
Самки 2,83 мг/кг	M	182,06	185,60	189,72	201,52	210,60	221,16	228,68	229,68
	m	0,24	0,30	0,42	0,54	0,44	0,51	0,35	0,40
	р	0,813	0,207	0,081	0,566	0,413	0,604	0,646	0,465

Таблица 4. Продолжение

Сроки Группа		День наблюдения
Сроки Группа		215	246	277	305	336	366	397	427
Самцы контроль	M	233,48	235,98	236,10	235,84	236,14	235,86	234,70	235,42
Самцы контроль	m	0,63	0,62	0,55	0,64	0,65	0,64	0,59	0,70
Самцы 0,086 мг/кг	M	233,60	235,06	236,08	236,26	236,60	235,08	235,96	235,90
	m	0,67	0,66	0,56	0,57	0,54	0,69	0,71	0,63
	р	0,896	0,310	0,980	0,624	0,588	0,411	0,174	0,611
Самцы 0,86 мг/кг	M	233,88	234,70	235,44	235,18	235,64	235,22	235,52	234,76
	m	0,62	0,66	0,55	0,59	0,55	0,72	0,66	0,69
	р	0,651	0,158	0,395	0,449	0,561	0,510	0,356	0,503
Самцы 2,83 мг/кг	M	233,20	234,90	235,46	234,64	236,26	235,66	236,00	235,46
	m	0,63	0,68	0,55	0,57	0,53	0,71	0,60	0,67
	р	0,753	0,240	0,409	0,162	0,887	0,836	0,125	0,967
Самки контроль	M	230,66	231,40	231,48	232,78	232,74	232,92	232,02	233,38
Самки контроль	m	0,52	0,67	0,68	0,64	0,67	0,66	0,62	0,68
Самки 0,086 мг/кг	M	230,10	231,36	230,46	232,06	231,40	232,90	232,70	232,44
	m	0,54	0,67	0,52	0,71	0,66	0,69	0,63	0,62
	р	0,460	0,967	0,235	0,454	0,157	0,983	0,441	0,310
Самки 0,86 мг/кг	M	231,56	232,52	232,66	231,28	232,34	231,18	232,98	232,84
	m	0,47	0,60	0,69	0,56	0,62	0,73	0,60	0,61
	р	0,206	0,216	0,224	0,081	0,662	0,080	0,268	0,556
Самки 2,83 мг/кг	M	230,10	231,94	231,74	231,06	231,90	232,44	230,94	231,56
	m	0,54	0,69	0,72	0,63	0,58	0,66	0,63	0,66
	р	0,460	0,577	0,792	0,059	0,342	0,608	0,223	0,059

Таблица 4. Окончание

Сроки Группа		День наблюдения
Сроки Группа		458	489	519	550	580	611	642
Самцы контроль	M	233,72	235,00	262,92	268,10	255,20	248,67	239,00
Самцы контроль	m	0,99	1,53	9,40	9,40	13,59	19,47	19,00
Самцы 0,086 мг/кг	M	236,53	233,89	226,44	234,00	233,25	251,00	243,00
	m	1,73	3,34	7,37	8,99	9,16	3,42	3,00
	р	0,166	0,780	0,004	0,017	0,191	0,895	0,855
Самцы 0,86 мг/кг	M	234,97	231,10	237,50	260,00	–	–	–
	m	2,17	4,26	12,45	–	–	–	–
	р	0,573	0,337	0,189	–	–	–	–
Самцы 2,83 мг/кг	M	233,22	236,14	219,67	248,00	254,00	248,00	240,00
	m	2,04	4,29	14,75	20,00	–	–	–
	р	0,817	0,782	0,021	0,401	–	–	–
Самки контроль	M	234,17	233,50	230,46	216,00	215,09	209,67	221,00
Самки контроль	m	1,51	3,26	6,02	7,26	7,70	10,06	7,00
Самки 0,086 мг/кг	M	234,31	234,40	227,80	207,68	212,89	223,09	211,00
	m	1,39	2,31	4,25	7,87	8,42	9,06	6,49
	р	0,946	0,820	0,714	0,455	0,860	0,366	0,447
Самки 0,86 мг/кг	M	236,60	236,14	224,62	216,67	228,17	228,50	229,50
	m	1,77	2,66	5,27	5,02	4,63	3,72	3,10
	р	0,298	0,539	0,468	0,941	0,153	0,074	0,250
Самки 2,83 мг/кг	M	235,74	238,00	220,00	220,00	242,00	243,00	–
	m	2,03	2,70	7,86	11,12	6,98	11,00	–
	р	0,526	0,343	0,360	0,774	0,070	0,131	–

У большинства подопытных животных в ходе проведения эксперимента, вплоть до 427-го дня наблюдения у мышей и до 489-го дня наблюдения у крыс, статистически значимых отличий в показателях массы тела от групп контроля не наблюдалось, имелись единичные случаи достоверных отличий показателей массы тела от групп контроля, как в меньшую, так и в большую сторону, не имеющие четких признаков закономерности. Указанные наблюдения можно объяснить индивидуальными особенностями животных.

В тоже время, в последующем периоде наблюдения, у мышей, получавших ГМДП в дозах 1,86 мг/кг и 6,13 мг/кг, а также у самцов крыс, получавших ГМДП в дозах 0,086 мг/кг и 2,83 мг/кг, наблюдалось прогрессирующее к завершению исследования статистически значимое отставание в показателях массы тела от соответствующих групп контроля. В то же время в остальных группах экспериментальных животных, несмотря на также имеющуюся летальность, статистически значимых отставаний в показателях массы тела от групп контроля не наблюдалось.

В соответствии с планом исследования проводилась некропсия тел погибших животных и макроскопическое изучение внутренних органов в поисках возникновения опухолей. Кроме того, проводилась плановая некропсия тел всех выживших мышей и крыс, получавших исследуемый препарат в течение 18 и 21 месяца, соответственно, и забор органов и тканей для последующего гистологического исследования.

Визуальных отличий в экспериментальных группах животных от контрольных животных не наблюдалось. Опухолей также не было обнаружено. Общая макроскопическая картина состояла в следующем.

Ротовая полость. Патологического содержимого не наблюдается.
Язык. Чистый, обычной формы, мягкой консистенции, бледного цвета.
Пищевод. Слизистая пищевода бледно-серого цвета, гладкая, блестящая, просвет проходим.
Желудок. Желудок с хорошо выраженными складками слизистой, слизистая бледно-серого цвета, влажная, блестящая, патологического содержимого не наблюдается.
Поджелудочная железа. Поджелудочная железа типичной локализации, бледно-серого цвета, плотная, на разрезе мелкозернистая.
Печень. Печень плотная с гладкой поверхностью, доли выражены, на разрезе бледно-коричневого цвета, малокровна.
Толстый и тонкий кишечник. Содержимое кишечника соответствует каждому из его отделов, слизистая образует характерные складки, влажная, бледно-серого цвета, просвет проходим, патологического содержимого не наблюдается.
Слизистые гортани, трахеи, главных бронхов. Бледно-розового цвета, гладкие, влажные, блестящие, просвет проходим, патологического содержимого не наблюдается.
Сердце. Сердце округлой формы, хорошо сокращено. Под эпикардом обычный венозный рисунок расположения коронарных сосудов. Створки клапанов тонкие, полупрозрачные. Эндокард гладкий, блестящий.
Аорта. Эластичная, интима чистая, гладкая, просвет проходим.
Почки. Капсула почек снимается легко, под ней гладкая поверхность, на разрезе почки слабого кровенаполнения с четким делением на слои, слизистая лоханок, мочевого пузыря бледно-серого цвета, влажная, блестящая, патологического содержимого не наблюдается.
Надпочечники. Надпочечники округлой формы, с четким делением паренхимы на корковую и мозговую зоны, бледно-серого цвета, не спаяны с окружающими тканями.
Селезенка. Селезенка типичной локализации, с гладкой капсулой, на разрезе серо-красного цвета, пульпа соскоба не дает.
Головной мозг. Оболочки мозга полупрозрачные, гладкие, блестящие. Извилины мозга хорошо выражены. На разрезе вещество мозга влажное, блестящее, с симметричным рисунком строения. Сосуды основания мозга расположены симметрично, со спавшимися стенками.
Органы грудной и брюшной полостей расположены правильно. Полости свободны от жидкостей и спаек.
Легкие. Легкие спавшиеся, доли различимы, бледно-серого цвета, покрыты тонкой плеврой, со слабым кровенаполнением, патологического содержимого не наблюдается.
Тимус. Тимус двудольный, листовидной формы, хорошо идентифицируется среди органов переднего средостения. Ткань эластичная, однородная, бледно-серая.
Щитовидная железа. Щитовидная железа красновато-бледного цвета, обычной величины и формы, умеренно плотной консистенции.
Семенники и эпидидимисы (у самцов). Семенники и эпидидимисы обычной формы, эластической консистенции, бледно-серого цвета. На разрезе в ткани семенников визуализируются слои.
Яичники (у самок). Яичники серо-розового цвета, эластической консистенции. Окружены небольшим количеством жировой ткани. На разрезе в ткани определяются фолликулы.
Матка (у самок). Двураздельная, плотная, поверхность гладкая, цвет бледный, желтовато-розовый. Полость без патологического содержимого. Рога тонкие, длинные, проходимы, патологического содержимого не наблюдается.

Гистологическому исследованию были подвергнуты следующие органы и ткани мышей и крыс, получавших исследуемый препарат в течение 18 и 21 месяца, соответственно: желудок, фрагмент тонкого кишечника, фрагмент толстого кишечника, печень, селезенка, почка, надпочечник, мочевой пузырь, головной мозг, легкое, сердце, семенник (у самцов), матка и яичник (у самок).

Проведенное исследование не выявило межгрупповых отличий в гистологической картине изученных органов у экспериментальных животных в сравнении с контрольными.

Заключение

Таким образом, внутрижелудочное введение Ликопида ГМДП производства АО «Пептек», Россия самцам и самкам мышей в течение 18 месяцев в дозах 0,186 мг/кг, 1,86 мг/кг и 6,13 мг/кг и крыс в течение 21 месяца в дозах 0,086 мг/кг, 0,86 мг/кг и 2,83 мг/кг не приводит к возникновению у подопытных животных опухолевых образований.

Полученные результаты расширяют знания относительно безопасности, в частности канцерогенности в длительных экспериментах in-vivo, препарата Ликопид (ГМДП) производства АО «Пептек», Россия.

Вклад авторов

Олег Сергеевич Гудырев, заведующий лабораторией НИИ Фармакологии живых систем, Белгородский государственный национальный исследовательский университет, Белгород, Россия, e-mail: gudyrev@bsu.edu.ru, ORCID ID 0000-0003-0097-000X. Автор занимался контролем качества проводимых экспериментов, статистической обработкой первичных данных исследования.

Татьяна Михайловна Андронова, президент, АО «Пептек», Москва, Россия, e-mail: peptek@peptek.ru, ORCID ID 0000-0001- 6166-8635. Автор определял цель, формировал дизайн исследования.

Евгения Ивановна Нестерова, главный специалист по лекарственным средствам, АО «Пептек», Москва, Россия, e-mail: med_spec@peptek.ru, ORCID ID 0000-0001-6713-1548. Автор занимался обоснованием выбора дозировок исследуемого препарата.

Результаты исследования канцерогенных свойств глюкозаминилмурамилдипептида в хронических опытах на мышах и крысах